8791 ответов в этой теме

[swistl]

Архимед, это все шокирует, конечно.
Я всегда верил, что в этих вот их развитых демократиях реально работают принципы верховенства права и народовластия.
А тут на тебе, меньше, чем за год система встала на голову. Это как дурной сон какой-то.

[Архимед]

Архимед, это все шокирует, конечно.
Я всегда верил, что в этих вот их развитых демократиях реально работают принципы верховенства права и народовластия.
А тут на тебе, меньше, чем за год система встала на голову. Это как дурной сон какой-то.

    Да, это шок. Это крах и моей картины Мира тоже, ведь помнишь там: Мордор и Лориэн, и т.д. Сейчас Мордор везде. То, что называли Конспирологией, есть единственно адекватная модель описания происходящего. Тайное Мировое Правительство не просто существует (это было понятно любому, кто имел силы напрячь извилины ещё в конце 90-х), но оно обладает реальными полномочиями и властью, позволяющими ему стирать суверенитеты, назначать президентов (смайлик спящего Бидона и в жопу ужаленного Макрона), отдавать приказы правительствам, и ставить эксперименты над целыми странами и народами. Это Факт. Уже нет и желания тонуть в трясине споров о мелких деталях про всякую хрень, про %% уколотых, про "коллективный иммунитет" и прочую бредятину. Это же всё ширма. Маскировка. Камуфляж. Для продавливания тотального переформатирования всего Мира, изменения всей текущей Формации. 

   Но страхом делу не поможешь, тем более, феназепам из аптек изъяли (и только полный идиот верующий в фейкопЛандемию может не понимать, что всё это совсем не совпадения. Нет сейчас случайных совпадений. Все камушки - в мозаику. Все. Именно так. Кто не понимает этого -  пусть и дальше смотрят Киселёва, Соловьёва, Петросяна и изучают статистику по Ковиду). Во-первых, мы нашли в себе мужество признать, что мы ошибались в оценке демократических институтов Запада. Они не работают. Точнее, они работают недостаточно хорошо, чтобы противостоять наступлению нового санитарного фашизма. Во-вторых, мы имеем смелость признать и то, что этот Заговор является сейчас основополагающим для объяснения всего. Т.е. вообще ВСЕГО: от позорного бегства американцев из Афганистана до верещания Греты. Ибо он имеет конечную цель - уничтожение (или тотальную перезагрузку) капитализма в том виде, который мы знаем. Удастся им это или нет - совсем скоро увидим. 

   2025-й год. Переломный Момент. О том прямо написал Шваб. О том вещали наши генералы, пытаясь достучаться до упоротых сенаторов. О том говорят многие сейчас. О том моё видео на канале. Точка невозврата. Когда 21 технологическая инновация войдёт в жизнь большинства населения планеты. Кстати, это же повод для оптимизма! Выше нос - всех не будут мочить уколами, хе-хе. Кому-то же надо быть полупроводниками "Интернета Вещей", людьми-батарейками, майнящими крипту, ну и материал для биологических опытов тоже нужен. Они же ищут Формулу Бессмертия, значит, им нужен огромный экспериментальный охват, нужно много подопытных крыс. Короче, им, вероятно, не нужен геноцид. Но им нужен полный, тотальный Контроль. Вот это то, что никаких сомнений не вызывает, и это то, ради чего, на самом деле, вся эта ковидошизофрения и начата.

   P.S. "Выборы" 19-го. Советую всем неуколотым купить то, что купить не успели, завершить все сделки, требующие регистрации в МФЦ, короче, как говаривали в старых рассказах "привести в порядок дела", хе-хе-хе.

   Дай Б-г пронесёт. Эх, как же мне хочется ошибиться! Вспомните Старый Мир! Когда вы могли запросто поехать куда угодно, на море, в горы, пойти на концерт, в кафе, в клуб, в Бар. Мы забыли о том, что можно радоваться простым вещам. Свободе. Цените каждую минуту Свободы. Далее её в Мире будет всё меньше и меньше, и, если кому-то кажется, что меньше уже некуда, то он глубоко заблуждается... Её будет всё меньше, а Контроля, в т.ч., контроля даже над мыслями - всё больше. Таков План. Он озвучен. Но народы и Старые Элиты сопротивляются, и это внушает Надежду. А пока... Наслаждайтесь Свободой, и вы, естественно, знаете теперь, ПРОТИВ КОГО голосовать на предстоящих "выборах".

Сообщение изменено: Архимед (13 сентября 2021 - 02:19)

[Архимед]

https://www.rbc.ru/p...a79472977cfb6d7

Путин сообщил, что должен уйти на самоизоляцию из-за COVID в окружении
Накануне Путин заявил, что из-за случаев заражения в окружении ему, вероятно, придется уйти на карантин.

   Помимо официального признания того, что жижа бесполезна и ни от чего не защищает (ведь САМ привит и окружение тоже - по крайней мере именно такими сказочками кормили верующих сектантов Секты Святого Барановируса), это ещё и сигнал всем об очередном витке репрессий и закручивания гаечек. О том намекали многие жрецы Секты: от Гинцбурга до Поповой, ну вот и ещё один Знак. Т.е., ширяйтесь каждые полгода шмурдяком, но Лохдауны никто не отменял, и их будут периодически вводить. Ну чтоб бараны не расслаблялись, значит, хе-хе. Театр Абсурда продолжается, ну а всем разумным людям, не сектантам и не упоротым, это лишний Знак.

   Приводите в порядок дела! Если есть незакрытые сделки - закрывайте скорее. У вас, по сути, неделя осталась. Если планируется сделка со сложными цепочками, например, покупка недвижимости с продажей собственной, и у вас нет чудо-укола, лучше отложить. Не начинайте бизнес, связанный со сферой услуг. Не надо покупать франшизу для открытия кафе, кальянной или бургерной. Вы прогорите. Лучше отложите эти деньги. Урежьте расходы, экономьте. Не берите кредитов. Ведите ЗОЖ, сейчас серьёзно, хоть из моих уст совет звучит неубедительно. Никто не знает, как будет работать плановая медицинская помощь. Учитесь тренироваться в домашних или уличных условиях. Неизвестно, что будет с фитнес-индустрией. Точнее, понятно, что она схлопывается, как и вся сфера услуг. Это часть Плана, и это будет происходить и далее. Сфера услуг - первая жертвенная овечка. Кстати, один из залов сети, в котором занимался до введения ограничений, закрылся "на дезинфекцию"...

   И молитесь, чтобы пронесло. Следующий понедельник покажет, что именно они удумали, но, естественно, ничего хорошего. Вопрос, насколько закрутят гайки - до срыва резьбы, или так, на пол-фюрера. Очень хочу ошибиться. Тот случай, когда лучше прослыть смешным паникёром, чем оказаться правым... И да. Совсем скоро нас ждёт 2-й Акт Мерлезонского Балета: Климатический. Это вот уже прямо совсем скоро. Заранее: это тоже не будет иметь никакого отношения к реальным изменениям Климата, - точно так же, как не имеет никакого отношения к медицине нынешняя театральная постановка. Это будет вал абсурдных политических актов, противоречащих друг другу и здравому смыслу, ну всё, как с фейко-вирусом, короче. 

Сообщение изменено: Архимед (14 сентября 2021 - 02:00)

[sandwolf77]

https://www.rbc.ru/p...a79472977cfb6d7
Помимо официального признания того, что жижа бесполезна и ни от чего не защищает (ведь САМ привит и окружение тоже - по крайней мере именно такими сказочками кормили верующих сектантов Секты Святого Барановируса), это ещё и сигнал всем об очередном витке репрессий и закручивания гаечек. О том намекали многие жрецы Секты: от Гинцбурга до Поповой, ну вот и ещё один Знак. Т.е., ширяйтесь каждые полгода шмурдяком, но Лохдауны никто не отменял, и их будут периодически вводить. Ну чтоб бараны не расслаблялись, значит, хе-хе. Театр Абсурда продолжается, ну а всем разумным людям, не сектантам и не упоротым, это лишний Знак.
Приводите в порядок дела! Если есть незакрытые сделки - закрывайте скорее. У вас, по сути, неделя осталась. Если планируется сделка со сложными цепочками, например, покупка недвижимости с продажей собственной, и у вас нет чудо-укола, лучше отложить. Не начинайте бизнес, связанный со сферой услуг. Не надо покупать франшизу для открытия кафе, кальянной или бургерной. Вы прогорите. Лучше отложите эти деньги. Урежьте расходы, экономьте. Не берите кредитов. Ведите ЗОЖ, сейчас серьёзно, хоть из моих уст совет звучит неубедительно. Никто не знает, как будет работать плановая медицинская помощь. Учитесь тренироваться в домашних или уличных условиях. Неизвестно, что будет с фитнес-индустрией. Точнее, понятно, что она схлопывается, как и вся сфера услуг. Это часть Плана, и это будет происходить и далее. Сфера услуг - первая жертвенная овечка. Кстати, один из залов сети, в котором занимался до введения ограничений, закрылся "на дезинфекцию"...
И молитесь, чтобы пронесло. Следующий понедельник покажет, что именно они удумали, но, естественно, ничего хорошего. Вопрос, насколько закрутят гайки - до срыва резьбы, или так, на пол-фюрера. Очень хочу ошибиться. Тот случай, когда лучше прослыть смешным паникёром, чем оказаться правым... И да. Совсем скоро нас ждёт 2-й Акт Мерлезонского Балета: Климатический. Это вот уже прямо совсем скоро. Заранее: это тоже не будет иметь никакого отношения к реальным изменениям Климата, - точно так же, как не имеет никакого отношения к медицине нынешняя театральная постановка. Это будет вал абсурдных политических актов, противоречащих друг другу и здравому смыслу, ну всё, как с фейко-вирусом, короче.

Саша, мы же живем в кап.государстве. руководство сращено с финансовой элитой и предствляет его интересы. Какая выгода крупному капиталу в таком торможении дел? Контроль за населением? Но ведь контроль ценен не сам по себе, а тем доходам, которым он открывает путь. А тут контроль за сидящими дома безработными, в чем выгода...

[Архимед]

Саша, мы же живем в кап.государстве. руководство сращено с финансовой элитой и предствляет его интересы. Какая выгода крупному капиталу в таком торможении дел? Контроль за населением? Но ведь контроль ценен не сам по себе, а тем доходам, которым он открывает путь. А тут контроль за сидящими дома безработными, в чем выгода...

   Прошу прощения за поздний ответ; было (и есть) немало незакрытых дел, а тема весьма серьёзная, чтобы отвечать "на от2,7бись". Вас интересует вопрос - какова конечная выгода вводимых санитарно-фашистских мер? О том можно только догадываться, поскольку конечный бизнес-план элиты, по понятным причинам, открыто не публикуют, но кое-что можно представить. Надвигается 2025-й год, Переломный Момент Четвёртой Промышленной Революции. Год, когда 21 инновация войдёт в жизнь большинства людей на планете Земля (в каких-то странах ранее, в каких-то, позже, это понятно).

   Вопросы Контроля в связи с этим выходят на первое место. Основное сейчас - это не извлекать прибыль как можно скорее (что видно из того, как практически все страны идут на экономические издержки Лохдаунов, взамен получая беспрецедентный Контроль над гражданами), но именно обрести полный, тотальный, абсолютный Контроль над юнитами. Далее уже, имея этот Контроль (буквально механический), можно планировать. Сценарии высказываются различные: от Апокалиптических до умеренных. Частичный геноцид не исключаю: все, кто стар, слаб, имеет хронические заболевания и прочее, не должны отягощать социальную и пенсионную системы, потому их можно и ликвидировать. Ну они просто не перенесут укольчик (пожизненные укольчики - таков План, и он никем даже не скрывается, пока люди с упорством, достойным лучшего применения, продолжают обсуждать "титры антител", "статистику по Ковиду" и прочий шизофренический бред, не имеющий никакого отношения к делу) и вымрут от осложнений с различным временным лагом, а статистика скажет, что "после - не значит вследствие"©, хе-хе. Но основную массу готовят, скорее всего, не на бойню. Как вариант - её готовят в качестве придатка к Интернету Вещей, в качестве заменяемых девайсов, полностью контролируемых и выполняющих строго необходимый набор действий. Ну и материал для биологических опытов тоже, само собой, - поиск Эликсира Бессмертия никто не отменял, а, чем шире Выборка (вся Планета), тем успешнее результат.

   Исследований, вроде этих, сейчас ведётся множество. Они могут немного сориентировать в размышлениях о том, какую возможную участь стаду уготовили. А пока надо просто приучить всех колоться. Без вопросов, без осознания, без рефлексии, уничтожив попутно всю правовую базу, которую человечество нарабатывало веками. Что и делается. 

 

 

https://www.research...Protein_Crystal

 

Magnetogenetics is a new field that leverages genetically encoded proteins and protein assemblies that are sensitive to magnetic fields to study and manipulate cell behavior. Theoretical studies show that many proposed magnetogenetic proteins do not contain enough iron to generate substantial magnetic forces. Here, we have engineered a genetically encoded ferritin-containing protein crystal that grows inside mammalian cells. Each of these crystals contains more than 10 million ferritin subunits and is capable of mineralizing substantial amounts of iron. When isolated from cells and loaded with iron in vitro, these crystals generate magnetic forces that are 9 orders of magnitude larger than the forces from the single ferritin cages used in previous studies. These protein crystals are attracted to an applied magnetic field and move toward magnets even when internalized into cells. While additional studies are needed to realize the full potential of magnetogenetics, these results demonstrate the feasibility of engineering protein assemblies for magnetic sensing.

 

https://www.research...ernet_of_Things

 

In the picture of the Internet of Things (IoT), smart human-machine interfaces (HMIs) play a significant role. Desired attributes for smart HMIs include multidimensional sensing, flexibility with stable responsiveness, and a long operational lifetime. To this end, in this article, we present a polyvinylidene fluoride (PVDF)/Au/polyethylene naphthalate (PEN) sandwiched architecture. Piezoelectric property of the PVDF is utilized for dynamic force sensing and touch-induced energy harvesting. A mutual capacitive based technique is employed for two-dimensional (2D) position recognition, hover distance measurement and curvature self-detection, as well as helping in compensating the static force detection shortage of the piezoelectric sensing layer. The presented HMI system achieved an overall force sensitivity at 0.07 N and capacitive resolution at 0.004 pF; and a force responsivity at 2.36 V/N in the pressure range of 1 N-30 N. In each touch event, the maximum capacitance change and the electric energy harvested in a stored capacitor are averaged at 0.016 pF and 0.038 nJ, respectively. Furthermore, interdigitated electrodes are implemented for self-detecting the device curvature. With pre-correlating of the force-voltage response under different bending degrees, a stable force detection response is realized when the shape of the device changes. The work presented in this article advances the field of human-machine interactivities.

 

https://pubmed.ncbi....h.gov/15756310/

The term "smart dust" originally referred to miniature wireless semiconductor devices made using fabrication techniques derived from the microelectronics industry. These devices incorporate sensing, computing and communications in a centimetre-sized package. This article discusses the construction of much smaller silicon-based systems, using the tools of nanotechnology. The synthesis of millimetre- to micron-sized functional photonic crystals made from porous silicon is described. It is shown how the various optical, chemical, and mechanical properties can be harnessed to perform sensing, signal processing, communication and motive functions.

 

https://en.wikipedia.../wiki/Smartdust

Smartdust^[1] is a system of many tiny microelectromechanical systems (MEMS) such as sensors, robots, or other devices, that can detect, for example, light, temperature, vibration, magnetism, or chemicals. They are usually operated on a computer network wirelessly and are distributed over some area to perform tasks, usually sensing through radio-frequency identification. Without an antenna of much greater size the range of tiny smart dust communication devices is measured in a few millimeters and they may be vulnerable to electromagnetic disablement and destruction by microwave exposure.

 

   Ну и информация к размышлению, в связи с вышесказанным. Хотя, думаю, основная жесть начнётся после того, как к регулярным и пожизненным уколам привыкнут, и начнут воспринимать их без протестов.

 

https://tass.ru/obschestvo/12246455

Отмечается, что в ходе вакцинации в городе Наха (административный центр Окинавы) в субботу в одной ампуле и двух шприцах было обнаружено некое черное вещество. В ходе проверки еще в одном шприце были обнаружены примеси розового цвета. Всего вакциной из этой партии привили порядка 400 человек, однако, как утверждается, это было сделано после того, как врачи визуально убедились в чистоте вещества в шприцах. О каких-либо проблемах со здоровьем у привитых не сообщается.

Между тем номер партии этой вакцины отличается от трех других, использование которых было приостановлено Министерством здравоохранения, труда и благосостояния Японии. Из-за этого инцидента вакцинация в одном из прививочных центров на Окинаве остановлена.

Ранее Минздрав Японии объявил о приостановке использования около 1,63 млн доз вакцины Moderna из трех партий, произведенных на территории Испании. Размер неизвестных частиц, обнаруженных в них, достигает нескольких миллиметров. Агентство Киодо сообщало, что неизвестные компоненты могут быть частицами металла, поскольку они реагируют на магниты. 

В субботу также стало известно о двух случаях смерти среди жителей Японии, получивших дозы препарата из партий, где были обнаружены инородные вещества. Умершие - мужчины 38 и 30 лет, у которых ранее не было выявлено хронических заболеваний и аллергических реакций. Они были привиты второй дозой вакцины 15 и 22 августа соответственно. На следующий день после вакцинации у обоих поднялась температура. Спустя три дня после прививки оба умерли по неустановленным причинам.

 

https://www.1tv.ru/n...ruzhili_primesi

В Японии скандал. В американской вакцине «Модерна» обнаружили примеси. Это, по данным СМИ, могут быть частицы металла. Дело в том, что они реагируют на магниты. Сообщается, что из этой партии, она была произведена на испанском заводе, привили уже около 170 тысяч человек. Японский Минздрав приостановил использование более чем полутора миллионов доз этого препарата. Как обнаруженные примеси могут повлиять на здоровье, пока непонятно. На данный момент информации о каких-либо отрицательных реакциях у людей не поступало. Идет расследование.

  Это лишь одна из версий, не претендующая на Истину в последней инстанции. Она может быть одним из множества возможных ответов на ваш вопрос, и объяснять творящееся безумие более-менее в рамках логики и известных Фактов. Проблема многих людей состоит в том, что они считают футурологической фантастикой и уделом отдалённого будущего то, что делается уже сейчас. Они просто недооценивают Четвёртую Промышленную Революцию. А издержки от Лохдаунов? Так это временно. Когда Контроль станет абсолютным, и ни один юнит шагу не сделает без сканирования своей кабины и отсылки QR-кода напрямую, в Систему Социальных Баллов, тогда можно и снять его или ослабить. Лохдаун - не самоцель, а способ приучить к послушанию, сломать волю и сделать творящийся Абсурд привычным. Похожим образом ломали волю в концлагерях. И в экспериментах Милгрэма. Абсурдные, противоречащие другу другу и здравому смыслу приказы, но исходящие от Авторитетов...

Сообщение изменено: Архимед (22 сентября 2021 - 10:49)

[sandwolf77]

Архимед,Саша, все равно не понимаю. Как сворачивание бизнесов поможет олигархам вместе с правительствами вести конкуренцию с другими группами олигархов. Зачем контроль при любом количестве промышленных революций, если доходы падают? Ну сидят все послушно дома, ок. Ну подсдох бизнес. Стало меньше денег у связки "олигархи/государства" . Но ведь конкуренция групп олигархов и подчиненных им стран остается, что радости если в конкретном болоте все подчиняются? Если конкуренты сожрут.

Растолкуй на пальцах, кому поможет превращение некой страны в такую технологичную бразилию, где нерабатающие толпы сидят дома в фавелах со смартфонами и выходят из квартиры по команде, если сама страна нищает при этом? Конкуренция то за ресурсы не исчезает...

[Архимед]

Архимед,Саша, все равно не понимаю. Как сворачивание бизнесов поможет олигархам вместе с правительствами вести конкуренцию с другими группами олигархов. Зачем контроль при любом количестве промышленных революций, если доходы падают? Ну сидят все послушно дома, ок. Ну подсдох бизнес. Стало меньше денег у связки "олигархи/государства" . Но ведь конкуренция групп олигархов и подчиненных им стран остается, что радости если в конкретном болоте все подчиняются? Если конкуренты сожрут.

Растолкуй на пальцах, кому поможет превращение некой страны в такую технологичную бразилию, где нерабатающие толпы сидят дома в фавелах со смартфонами и выходят из квартиры по команде, если сама страна нищает при этом? Конкуренция то за ресурсы не исчезает...

  Есть немалые основания (и Факты) полагать, что осуществлён гигантский корпоративный сговор между основными Игроками. Те, кто вне его, сопротивляются безумию разрушительных мер, - в т.ч., через политические рычаги. Или мечтают присоединиться, чуя собственную гибель, выказывая внешние знаки лояльности. Смайлик Деребаски, слезшего с яхты и рассуждающего о снижении потребления во имя Окружающей Среды. Растолкую обязательно - в видео, время на съёмки которого никак не могу выкроить пока, именно в силу того, что это будет не просто болтовня диванного конспиролуха, но будут приведены Факты. Пока банально не успеваю всё оформить, как надо, а снимать на скорую руку свои догадки, без подкрепления Фактами нет желания, поскольку это пойдёт только во вред.

   Спешу сообщить, что чувствую себя прекрасно, очень люблю жизнь во всех её проявлениях, не планирую сводить с ней счёты, в случае попадания в больницу по любым поводам, не желаю подключения к ИВЛ и приёма препаратов, которые могли бы этому способствовать, также нет желания шагать в окно или прыгать с крыши, вообще высоты боюсь. По улицам хожу осторожно, перехожу всегда на зелёный свет и по зебре, в конфликты не ввязываюсь, и вообще просто очень люблю Жизнь! Ну а ежели серьёзно, то постараюсь объяснить. Просто иногда и отдыхать от всего надо, а не только читать, как роботу, анализировать прочитанное, в тщетных попытках состязаться с ИИ Врага, да крутиться в беличьем колесе повседневных дел...

Сообщение изменено: Архимед (22 сентября 2021 - 08:05)

[Архимед]

   Читаю тут всякие статьи, обзоры, и не покидает ощущение Дежавю. Много раз говорилось, что бесконечно накапливать Долг нельзя. Что вечно "разбрасывать деньги с вертолёта" нельзя. Нельзя вечно плодить "корпоративные бумаги - зомби", живущие на заёмные средства, и искажающие картину. Многие сетовали на то, что современная Экономика стала настолько сложной, что её истинное устройство понимают хорошо, если несколько тысяч человек в Мире (как с передним краем Физики). А тут и фейковирус подоспел. И вслед за ним Великий Сброс (пока в планах). И апокалиптические обложечки журнала "Экономист"...

https://www.economis...-rules-can-help

America’s debt ceiling is a disaster, though fiscal rules can helpI

t is once again time for that most bizarre of economic spectacles, a debt-ceiling showdown in America. In the name of fiscal responsibility, the world’s biggest economy is flirting with an act of brazen irresponsibility: a sovereign default. The government has just about exhausted its current statutory debt limit of $28.5trn, after which it will struggle to honour its obligations. Janet Yellen, the treasury secretary, has warned that the government will probably run out of cash sometime next month.

Most economists and executives assume that America will come to its senses before then.

   Одумается ли Америка? Глядя на Байдена, Харрис, продажных конгрессменов, и одуревших от чувства приближённости к Небу богачей, на Гейтса, Уолл-стрит, на их говорящих кукол, вроде Фаучи, на позорное бегство из Афганистана, на поток беженцев через границу в Техасе, на моральное разложение и разгул содомитов всех мастей, - сомнительно...

   Параллельно немного исторических Фактов. Напомню, что ни одна валюта не жила вечно. Британский фунт существует с 1694 года, и что же он представлял из себя тогда, и что представляет сейчас?

https://www.britanni.../pound-sterling

Pound sterling, the basic monetary unit of Great Britain, divided (since 1971) decimally into 100 new pence. The term is derived from the fact that, about 775, silver coins known as “sterlings” were issued in the Saxon kingdoms, 240 of them being minted from a pound of silver, the weight of which was probably about equal to the later troy pound. Hence, large payments came to be reckoned in “pounds of sterlings,” a phrase later shortened to “pounds sterling.”

https://www.britanni...-unit-of-weight

 

Pound, unit of avoirdupois weight, equal to 16 ounces, 7,000 grains, or 0.45359237 kg, and of troy and apothecaries’ weight, equal to 12 ounces, 5,760 grains, or 0.3732417216 kg. The Roman ancestor of the modern pound, the libra, is the source of the abbreviation lb. In medieval England several derivations of the libra vied for general acceptance. Among the earliest of these, the Tower pound, so called because its standard was kept in the Royal Mint in the Tower of London, was applied to precious metals and drugs and contained 5,400 grains, or 0.350 kg, whereas the mercantile pound contained 6,750 grains, or 0.437 kg. 

   Хочу, чтобы все перечитали это ещё раз. И перечитывали до тех пор, пока не сложится паззл. Фунт стерлингов на заре своего рождения "весил" 12 тройских унций серебра, или 373 грамма серебра. Сколько серебра можно купить за фунт стерлингов сегодня? Ну, посмотрите котировки серебра. Ещё раз. В 1964 году за фунт стерлингов можно было купить 12 тройских унций серебра. А сегодня... Чуть более 0,05 унции. Вы не ослышались. И глаза вас не подвели. Сам поначалу думал, что меня подвело гуманитарное образование... Фунт, который существует более 300 лет, потерял 99% своей стоимости. В серебре. В золоте и считать не буду. Страшно потому что. 

   P.S. Никакой паники, никакого отчаяния. Просто вам должно стать чуть понятнее на этом примере, что такое Функции Денег, описанные Марксом. И что выполняет эти Функции наилучшим образом. Сможет ли их выполнять Биткоин или любая иная криптовалюта? Отключите электричество, и... Бинарная ставка. Которая завтра может прыгнуть и к миллиону долларов, а послезавтра упасть до нуля... Попытка выполнить работу Бога: будь то генетически спроектированные в пробирке Moderna, новые Существа, управление погодой в Китае, или создание фальшивых денег, - обречено на неудачу. Человек не может синтезировать Элемент Бога, не может Творить Жизнь и Эволюцию, не может менять Климат безнаказанно. Конец будет, и он будет непредсказуем. Что же далее, спросите вы? Это зависит от того, во что вы верите. От вашей картины Мира и персонального словаря...

Сообщение изменено: Архимед (30 сентября 2021 - 05:35)

[Архимед]

Как и было предсказано. Коронабесы развёртывают новый фронт. "Выборы" отгремели, пора и гайки завернуть. Пока, правда, слабовато, зато сделан акцент на определённую аудиторию (детей). Конспирология, выходит дело, обретает предсказательную силу, хе-хе. 

https://www.donland.ru/news/15554/

Губернатор Ростовской области Василий Голубев подписал сегодня, 1 октября, документ, вносящий изменения в постановление регионального правительства №272. Новые ограничения вступают в силу с понедельника, 4 октября.

В соответствии с изменениями, работодатели должны перевести на дистанционную работу не менее 30% своих работников, в том числе в возрасте 65 лет и старше, а также сотрудников с хроническими заболеваниями.

С 4 октября в донских медорганизациях приостанавливается проведение профилактических осмотров и диспансеризации для всех взрослых граждан. Исключение сделано для углубленной диспансеризации тех, кто перенес COVID-19, диспансеризации детей, проведения вакцинации в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок и Календарем профилактических прививок по эпидемическим показаниям.

При выступлениях музыкальных, театральных и иных коллективов в помещениях с посадочными местами заполняемость помещений зрителями не должна будет превышать 50 процентов, при этом максимальное число зрителей в помещениях – 500 человек.

Приостановлена работа танцевальных залов (площадок), в том числе – в предприятиях общественного питания.

Временно – до 1 ноября – прекращена и реализация образовательными организациями дополнительных образовательных программ для детей младше 18 лет. Исключение составляют дистанционный формат и формат индивидуальных занятий.

https://www.donland.ru/news/15500/

Ход вакцинации в Ростовской области обсудили сегодня, 28 сентября, на заседании регионального штаба по координации деятельности по предупреждению завоза и распространения новой коронавирусной инфекции. Совещание провел губернатор Василий Голубев.

По данным регионального минздрава, на сегодня в Ростовскую область поступило свыше 2,1 млн доз вакцины от COVID-19. Прививки от новой коронавирусной инфекции сделали почти 1,6 млн человек.

Министр здравоохранения области Юрий Кобзев доложил губернатору, что план вакцинации взрослого населения в Ростовской области выполнен на 57,44%. В регионе развернуто 353 пункта вакцинации против COVID-19, работает 185 мобильных пунктов. Всем жителям доступна запись на вакцинацию через единый портал госуслуг.

Однако, сообщил министр, снижаются темпы прививочной кампании среди пожилых граждан. Среди студентов заявку на вакцинацию от COVID-19 подал только один донской вуз – РостГМУ.

Эпидемическая ситуация в регионе остается напряженной, сохраняется тенденция роста заболеваемости.  В стационарах находятся более четырёх тысяч пациентов. Загруженность коечного фонда возросла до 90%. Амбулаторное лечение получают более 7,5 тысячи заболевших.

Губернатор подчеркнул, что главы муниципалитетов лично отвечают за работу по вакцинации в территориях. Единственный путь остановить распространение коронавирусной инфекции – это массовая вакцинация, напомнил Василий Голубев.

Глава региона поручил своему заместителю представить предложения по ускорению темпов вакцинации на Дону.

- Необходимо разработать новые формы привлечения жителей к прививочной кампании. Надо доносить людям информацию о важности вакцинации различными способами, вновь напоминать, что привитый человек переносит это заболевание в более легкой форме. Вакцина поступает в Ростовскую область динамично и регулярно, - сказал губернатор.

Василий Голубев отметил, что контроль за ходом вакцинации должен быть постоянным и ежедневным.

В целом, настолько предсказуемо, что уже даже "слишком просто, потому неинтересно"©.

P.S. Пусть эта замечательная картинка будет тут. Это всё мировое золото в наглядной и простой для восприятия форме. Более наглядной картинки пока не нашёл.

 

[Архимед]

   Надо понимать, что наши назгулы всё копируют у тамошних рептилоидов. Греф с Мишустиным, участвуя в Киберполигоне, просто своими словами пересказывали методички Шваба. Что и неудивительно, они работают в связке:

https://www.weforum....s/cyber-polygon

https://cyberpolygon...s-and-partners/

 

   P.S. Вспоминаем, в связи с предыдущим постом, новый законопроект о принудительной эвакуации в случае объявления ЧС. Т.е., покинуть жилища и отправиться в специальные места - станет обязанностью жителей в определённых законом случаях. 

https://sozd.duma.go.../bill/1120845-7

http://static.consul...321-1120845.pdf

 

   P.P.S. Ах, да! При чём тут, казалось бы, добровольно-принудительная факцинация? Ладно, выдохните пока. Идёт Большая Игра. Нам видны некоторые всполохи Битвы. Шуршание законопроектов Госдурки. Гудение серверов Киберполигона. Всплывающие ленты Новостей. Важно уметь сопоставлять Факты, видеть взаимосвязи, и просчитывать риски, и, в то же время, не паниковать излишне, поскольку, как показывает практика, бОльшая часть подобных планов, обычно уходит в свисток, либо её даже не пытаются реализовать. Кроме того, у каждого плана А, всегда есть запасной план В, и т.д.

   Но и благодушно расслабляться тоже не стоит. Как не стоит переводить драгоценное время на всякую ерунду, вроде изучения "статистики по Ковиду"©, чтения бесполезных, в контексте сказанного, статей про "шиповидные белки, титры антител, коллективный иммунитет"©, и прочую бредятину, которая к делу отношения не имеет в принципе, никогда не имела, и никогда иметь не будет. Всё сейчас решает Экономика. Впрочем, как и всегда. Ave, Marx!

Не знаю, как вы, сам уш устал удивляться этим Огненным Буквам в Небе... Ну а ежели кто считает, что это глобальное падение - просто технический сбой, то... Тем, кто ложится спать, спокойного сна, короче...

[oscid]

[oscid]

[Архимед]

Картинки? Их есть и у меня!

Очередь за шмурдяком.

Особый вид ковидофрении: это кинотеатры. Платежи наличными за билеты в них отныне в Ростове запрещены. Именно по причине того, что такая форма платежей, якобы, способствует распространению заразы. При этом попкорн тут же продаётся за наличные. Масса кафешек рядом - тоже принимает наличные. Шизофрения? Увы. Обыкновенный Заговор. Но, когда все молодые-прогрессивные-креативные любители безнала и пластика, а также запуганные фейковирусом телезрители, наконец, это поймут, будет уже поздно. Безнал - прекрасный способ контролировать стадо. И загнать любого барана в любое стойло.

В связи со всей этой шизофренией доступ к занятиям спортом в секциях, в стране, в большинстве регионов, неуколотым закрыт. Потому приходится извращаться по-всякому. Антиваксер-андеграунд-жыд-Аушвиц-тренинг, короче.

Сэр Эмраер осаждает замок мятежного барона. На самом деле решил просто соорудить во дворе нечто дендрофекальное (из говна и палок) для занятий именно во дворе. А то мало ли, кто знает, что в голову ковидошизоидам стукнет, могут и в парки выходить запретить...

Пауки не боятся фейковирусов. Их самих все боятся.

Котам и морским свинкам тоже, в общем, пофиг вся эта обезьянья истерика бипедальных мартышек, называющих себя, почему-то, разумными (как показали последние 2 года - необоснованно).

На словах ты Лев Толстой, а на деле - Бар простой.

Собачка тоже умеет стоять и ходить на руках передних лапках. Она прошла на передних лапах метров 10! Ладно Архимед - он обезьяна, но чтобы собака такое вытворяла?!

Местный "Титаник".

Сообщение изменено: Архимед (15 октября 2021 - 10:25)

[Архимед]

Жесть, как она есть... Простите, Элемент Бога. На Королеву намордник натянули. Пожалуй, тут и от комментариев воздержусь. Ровно тройская унция Элемента Бога 0,9999 пробы. 170 000 стоит (естественно, только в Москве, только по предзаказу, и, скорее всего, уже нет в продаже). Но такое покупать даже как-то кощунственно. Ну и очередной ЗнакЪ, да. Это само собой.

https://vk.com/marke...5482822_5325586

https://ru-ru.facebo...

 

Миниатюры

• 
• 

[ehdima]

Жесть, как она есть... Простите, Элемент Бога. На Королеву намордник натянули. Пожалуй, тут и от комментариев воздержусь. Ровно тройская унция Элемента Бога 0,9999 пробы. 170 000 стоит (естественно, только в Москве, только по предзаказу, и, скорее всего, уже нет в продаже). Но такое покупать даже как-то кощунственно. Ну и очередной ЗнакЪ, да. Это само собой.

https://vk.com/marke...5482822_5325586

https://ru-ru.facebo...

Застолбили, как символ эпохи. 

[Архимед]

Застолбили, как символ эпохи. 

Вне всякого сомнения, это очередной Знак. Вроде этого вот:

Другое дело, что покупать такое вот... Рука не подымется. Ну это как купить нечто Богохульное, пусть и из золота. В Мире много золота в иной, более потребной форме. При том, что тираж ограничен, и, возможно, станет нумизматической редкостью, и цена скакнёт.

[swistl]

Жесть, как она есть... Простите, Элемент Бога. На Королеву намордник натянули. Пожалуй, тут и от комментариев воздержусь. Ровно тройская унция Элемента Бога 0,9999 пробы. 170 000 стоит (естественно, только в Москве, только по предзаказу, и, скорее всего, уже нет в продаже). Но такое покупать даже как-то кощунственно. Ну и очередной ЗнакЪ, да. Это само собой.
https://vk.com/marke...5482822_5325586
https://ru-ru.facebo...

А мне кажется это такой своеобразный йумор

[Архимед]

А мне кажется это такой своеобразный йумор

На тему ведьмы Лизы шутить не особо принято, все "шутники" потом жалеют обычно (немало голливудских карьер было поломано таким "шутникам"), хотя, если йумор исходит из самого Виндзорского замка, в качестве некоего финансового Тренда, то возможно.

[Архимед]

Увлекшись Конспирологией (а куда сейчас без неё?), совсем забросил освещение тренировок. Сами-то тренировки не забросил, хотя суеты было за последние пару месяцев немало. Вот так проходили тренировки в начале осени 2021 года - с началом фашистской сегрегации и апартеида в Ростове-на-Дону, введёнными диктаторским режимом Голубя. Это повлекло неисчислимые бедствия для всех, многие бизнесы разорились, люди лишались работы, распадались семьи, но главное - нас стали приучать к тому, что мы, неуколотые, - люди второго сорта, унтерменши. Жиды с Жёлтыми Звёздами, и без собачьих паспортов уколов. История ничему не учит наследников висельников Нюрнберга, и повторяется в виде фарса...

В конце демонстрация (для видео, не "в отказ") т.н. "Теста Скалолаза". Пробуйте! Отличный способ, наряду с канатом, усилить свой хват до воистину обезьяньих показателей. Чтобы Гейцу трахею через жопу вытащить, например. Голыми руками, без щипцов. Шутка, хе-хе. Шутка потому, что руки марать не хочется. И только лишь поэтому.

P.S. С братко Сербом вышел дело сегодня интересный диалог, так что на память, кину уш сюда мал мал.

 

Не нужен парк уш, вот не нужен он!

Когда канат висит в своём дворе!

И даже, в Карантине заточён,

Свободен ты! Ты сам себя Творец!

 

Топор возьми и остро заточи!

И распечатай Гейца гнусный лик!

В него метни! Пусть, сука, замолчит!

Дров наколи, и сделай уш шашлык.

 

Топор хорош во всём. Как инструмент.

Как способ тренировки и допвес.

Как крайний и тяжёлый Аргумент.

Купи топор! Таков мой Манифест!

[Анчёус]

Молитвой окрести себя рукой
И хорошо иконы все ты расцелуй
Тапор не принесет тебе
Чтоб хорошо
Да даж если и рубить дрова
Всегда же может соскользнуть
Ни чаяно рука
Купи ты лучше бензовот пилу
Получая она во всем к тому
Не нужно и махать ей ни к чему
Жужится страшно хорошо
Достаточно же веть вкл её

Сообщение изменено: Анчёус (05 ноября 2021 - 01:17)

[Архимед]

Молитвой окрести себя рукой
И хорошо иконы все ты расцелуй
Тапор не принесет тебе
Чтоб хорошо
Да даж если и рубить дрова
Всегда же может соскользнуть
Ни чаяно рука
Купи ты лучше бензовот пилу
Получая она во всем к тому
Не нужно и махать ей ни к чему
Жужится страшно хорошо
Достаточно же веть вкл её

Хорошая ведь вещь - бензопила!

Был диалог в "Бегущем человеке":

"То часть меня! Но и в тебе могла

Стать тоже частью!" Слово Дровосека!

 

С фашистской тварью - краток разговор!

Топор меж глаз! На кол! Петлю на шею!

Рука не дрогнет. Холодит затвор.

Колоть дрова неплохо уш умею...

 

Настанет день - заплатят все сполна!

Кто нас делил на чистых и нечистых.

Проснитесь, люди! В маске Сатана.

Пора гирлянды вешать из фашистов!

Сообщение изменено: Архимед (05 ноября 2021 - 01:39)

[Анчёус]

Архимед,
Ну ладно чт уш ерунда
Давай ты с позитивом Саша вот всегда
И буть чт будет вот тогла
Норм будет всё тогла

[Анчёус]

Те вот ветки нужности одни
Чего в уныния ты в таком теперь
Не нужен гак тебе и жим ногой и смит
Зимой скатать тебе достаточно веть колобка
Нагрузки хватит вот тебе же он него всегда
Ты сам себя нервируеш всегда
Потому и пьеш ты веть ни иногда
По пьяны рубанеш своим ты топором
На ветку ты полезишся за шеену в кольцо

Сообщение изменено: Анчёус (05 ноября 2021 - 01:48)

[Анчёус]

Дубль

Сообщение изменено: Анчёус (05 ноября 2021 - 01:56)

[Анчёус]

Бросай и пить быстрей ты тож
Удачи Саша вот тебе во всемж
И ни тужи ты ни про чт
Норм будет оч всё
Проверь себя ты не на чiп
Печенку лучше ты свою
Восьмого залы веть откроются и го
Желею даж рано оч что)

Сообщение изменено: Анчёус (05 ноября 2021 - 01:55)

[Архимед]

Бери себя ты в руки сам
Раз нету у тебя ну цепких сильных лап

Мои уш лапки нынче, как ключи.

Им вытащить ключицу - не проблема.

Перековать уш гири - на мечи

Давно пора. Фашистская экзема

 

Ползёт, как глист, как Фаучи - к деньгам.

Но ты не думай, я вполне спокоен.

Не дремлет Враг. На горе всем врагам,

Пока дышу и мыслю, - значит - Воин.

 

P.S. Хорошо тебе, братко Серб, в зале, вон, хорошем. Мой зал тоже был хорош. Но, как верно ты заметил, мне много оборудования не нужно. Сейчас во дворе уш почти готов спортуголок, жду канат, потом сфотографирую, ну и следующие тренировки буду снимать уже дома и, возможно, частично в парке. 

[Анчёус]

Ну откроют же тебе
Код раздобудеш же
Найди хоть бабу ты себе
Не разрешит она веть пить тебе
А так чего ты вот смотри
Ну пропадеш без чипа даже ты
Не тролю знаеш точно ты
Себя ты саша береги
И выкинь ты Тапор скорей ну же
И кольца тоже побыстрей
На фитнес лучше в тренажорчики поди
И басик и парилки тож вот себе
Кросфит он просто надоел тебе
Псих перетреня у тебя ну от него вобще

[Анчёус]

И кстати как скажи твои коты
Живы здоровы все они
Ну говорили раньше чт они
Короной заболеться могут тож же вполне

[Архимед]

И кстати как скажи твои коты
Живы здоровы все они
Ну говорили раньше чт они
Короной заболеться могут тож же вполне

Братко Серб, знаю, что ты зогбанен, но, возможно, прочитаешь. Коты, как существа, живущие на границе Миров, прекрасно "видят", что к чему, так что их этой шляпой не пронять, хе-хе. Меня уш тем более, как их компаньона и Друга (смею надеяться). А давай мы погадаем на... Нет, не на кофейной гуще. На Фёдоре Михайловиче, например...

 

"Он пролежал в больнице весь конец поста и Святую. Уже выздорав­ливая, он припомнил свои сны, когда еще лежал в жару и бреду. Ему грезилось в болезни, будто весь мир осуждён в жертву какой-то страш­ной, неслыханной и невиданной моровой язве, идущей из глубины Азии на Европу. Все должны были погибнуть, кроме некоторых, весьма немногих, избранных. Появились какие-то новые трихины, существа микроскопические, вселявшиеся в тела людей. Но эти существа были духи, одаренные умом и волей. Люди, принявшие их в себя, становились тотчас же бесноватыми и сумасшедшими. Но никогда, никогда люди не считали себя так умными и непоколебимыми в истине, как считали зараженные. Никогда не считали непоколебимее своих приговоров, своих научных выводов, своих нравственных убеждений и верований. Целые селения, целые города и народы заражались и сумасшествовали. Все были в тревоге и не понимали друг друга, всякий думал, что в нём в одном и заключается истина, и мучился, глядя на других, бил себя в грудь, плакал и ломал себе руки. Не знали, кого и как судить, не могли согласиться, что считать злом, что — добром. Не знали, кого обвинять, кого оправдывать. Люди убивали друг друга в какой-то бессмысленной злобе. Собирались друг на друга целыми армиями, но армии, уже в походе, вдруг начинали сами терзать себя, ряды расстраивались, воины бросались друг на друга, кололись и резались, кусали и ели друг друга. В городах целый день били в набат: созывали всех, но кто и для чего зовёт, никто не знал того, а все были в тревоге. Оставили самые обыкновенные ремесла, потому что всякий предлагал свои мысли, свои поправки, и не могли согласиться; остановилось земледелие. Кое-где люди сбегались в кучи, соглашались вместе на что-нибудь, клялись не расставаться, — но тотчас же начинали что-нибудь совершенно другое, чем сейчас же сами предполагали, начинали обвинять друг друга, дрались и резались. Нача­лись пожары, начался голод. Все и всё погибало. Язва росла и подвига­лась дальше и дальше. Спастись во всём мире могли только несколько человек, это были чистые и избранные, предназначенные начать и род людей и новую жизнь, обновить и очистить землю, но никто и не видал этих людей, никто не слыхал их слова и голоса.

 

Раскольникова мучило то, что этот бессмысленный бред так грусть так мучительно отзывается в его воспоминаниях, что так долго проходит впечатление этих горячечных грёз", - Ф.М. Достоевский. 

 

P.S. Воистину в этих снах Раскольникова, сиречь, самого Фёдора Михайловича, - куда больше полезной информации, чем в так любимых нашими головастиками от нОуки, источниках. Тут и говорить не о чем. А иные - пусть считают "титры антител" и следят за Омикроном (или как там его?). 

Сообщение изменено: Архимед (27 ноября 2021 - 11:10)

[Архимед]

Но, поскольку Архимед с утра хоть и разогнался, но, в отличие от учОных, зажатых в Прокрустовом Ложе лживых изменчивых Парадигм, свободен в полёте мысли, можно нырнуть мал мал и в Науку. Интересная ссылочка:
https://eprints.soton.ac.uk/426978/

DNA – Coated gold nanoparticles for the detection of mRNA in live Hydra vulgaris animals

 
Moros, Maria, Kyriazi, Maria-Eleni, El-Sagheer, Afaf, Brown, Tom, Tortiglione, Claudia and Kanaras, Antonios (2018) DNA – Coated gold nanoparticles for the detection of mRNA in live Hydra vulgaris animals. ACS Applied Materials & Interfaces. (doi:10.1021/acsami.8b17846).

Record type: Article

Abstract
Advances in nanoparticle design have led to the development of nanoparticulate systems that can sense intracellular molecules, alter cellular processes, and release drugs to specific targets in vitro. In this work we demonstrate that oligonucleotide – coated gold nanoparticles are suitable for the detection of mRNA in live Hydra vulgaris - a model organism - without affecting the animal’s integrity. We specifically focus on the detection of Hymyc1 mRNA, which is responsible for the regulation of the balance between stem cell self-renewal and differentiation. Myc deregulation is found in more than half of human cancers, thus the ability to detect in vivo related mRNAs through innovative fluorescent systems is of outmost interest.

 

DNA – Coated Gold Nanoparticles for the Detection of mRNA in Live Hydra Vulgaris Animals

 Maria Moros,^a,¥ Maria-Eleni Kyriazi,^b,¥ Afaf H. El-Sagheer,^c,d Tom Brown,^c Claudia Tortiglione,^a,* and Antonios G. Kanaras^b,e,*

 

^a Istituto di Scienze Applicate e Sistemi Intelligenti “E.Caianiello”, Consiglio Nazionale delle Ricerche, Pozzuoli, Italy.

^b Physics and Astronomy, Faculty of Physical Sciences and Engineering, University of Southampton, Southampton, SO171BJ, UK.

^c Department of Chemistry, University of Oxford, Chemistry Research Laboratory, 12 Mansfield Road, Oxford, OX1 3TA, UK.

^d Chemistry Branch, Department of Science and Mathematics, Faculty of Petroleum and Mining Engineering, Suez University, Suez 43721, Egypt.

^e Institute for Life Sciences, University of Southampton, Southampton, SO171BJ, UK.

^¥ These authors contributed equally

 

 

ABSTRACT

Advances in nanoparticle design have led to the development of nanoparticulate systems that can sense intracellular molecules, alter cellular processes, and release drugs to specific targets in vitro. In this work we demonstrate that oligonucleotide – coated gold nanoparticles are suitable for the detection of mRNA in live Hydra vulgaris - a model organism - without affecting the animal’s integrity. We specifically focus on the detection of Hymyc1 mRNA, which is responsible for the regulation of the balance between stem cell self-renewal and differentiation. Myc deregulation is found in more than half of human cancers, thus the ability to detect in vivo related mRNAs through innovative fluorescent systems is of outmost interest.

 

 

KEYWORDS: Hydra vulgaris, gold nanoparticles, oligonucleotides, mRNA detection, Hymyc1, nanoflares

 

INTRODUCTION

 

  In recent years gold nanoparticles (AuNPs) have been at the forefront of scientific research due to their attractive properties, which stem from their tuneable shape, size and ligand functionalization.¹In particular, spherical AuNPs have been extensively utilized due to their ease of synthesis as well as the ability to easily modify their surface with a variety of functional ligands using Au-S chemistry.^2-6Among various types of functional ligands, AuNPs coated with synthetic oligonucleotides are very attractive for biomedical applications because they combine the unique properties of oligonucleotides, such as selectivity and specificity, with the optoelectronic properties of the gold core. Oligonucleotide – AuNP hybrids present enhanced colloidal stability, high cellular uptake without the requirement of co-carriers and resistance to enzymatic degradation, advantages, which have been explored for oligonucleotide detection as well as drug delivery in cells.^{2, 7-9}

  Specific detection is achieved by careful design considerations, which include the appropriate choice of oligonucleotides in terms of length and base content as well as the proper oligonucleotide density on the AuNP surface, with the aim on one hand to prevent nanoprobe degradation by enzymes and on the other hand to retain oligonucleotide functionality and nanoparticle stability.¹⁰Well-designed oligonucleotide – coated nanoparticles have been shown to be effective in the regulation of gene expression.^{2, 11}For example, Rosi et al. demonstrated the use of oligonucleotide – coated nanoprobes for the downregulation of enhanced green fluorescent protein (EGFP). Upon uptake, a significant knockdown of the gene was observed in a mouse endothelial cell line (C166).¹²On the other hand, Giljohann et al. demonstrated the significant downregulation of luciferase in HeLa cells and Cutler et al. showed how such systems could silence the epidermal growth factor receptor (EGFR) in SCC12 cells.^{13, 14}      Furthermore, gene silencing has also been successfully demonstrated an in vivo where Jensen et al. designed oligonucleotide – coated nanoprobes as an RNAi therapy of glioblastoma multiform (GBM) by targeting and knocking down bcl2l12 mRNA and the associated protein levels, which tend to be overexpressed GBM.¹⁵Following this study, Sita et al. demonstrated how the commonly administered drug for the treatment of GBM, temozolimide (TMZ), could be rendered more efficient by knocking down O6-methylguanine-DNA-methyltransferase (MGMT), a protein that hinders the drugs’ mechanism of action.¹⁶de la Fuente and co-workers also reported the use of siRNA nanoprobes to target tumour cells in lung cancer models via the downregulation of c-myc.¹⁷They succeeded to induce RNAi both in vitro and in vivo, developing multiple strategies to bind siRNA to the gold nanoparticle core and achieving up to 80% of gene downregulation.^{18, 19}

  Oligonucleotide – gold nanoparticle hybrids have also been used for the detection of intracellular targets including microRNA and mRNA. Mirkin and co-workers showed the utilization of such nanoprobes for the detection of survivin mRNA as well as the detection of genetic markers of circulating tumour cells (CTC) in human blood including mesenchymal markers such as twist, vimentin and fibronectin and the epithelial marker E-cadherin. ^{20, 21}Similarly, Yang et al. used FRET oligonucleotide coated gold nanoparticles to target tk1 mRNA, a target associated with cell division and tumor growth, in HepG2, MCF-7 and L02 cells whereas Wright and co-workers made use of hairpin DNA – coated AuNPs for the detection of specific mRNA sequences for glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) in Hep-2 cells and the Respiratory Syncytial Virus (RSV) in live RSV infected Hep-2 cells.^{22, 23}On the other hand, Zhou et al. used a hairpin system focusing on the detection of mdr1 mRNA, which has been associated with the prediction of multidrug resistance of tumor cells.²⁴Moreover, research by our group has showed that oligonucleotide – coated AuNPs can be specifically designed to detect vimentin, desmocollin and keratin8 mRNAs, targets associated with the process of epithelial to mesenchymal transition (EMT) in live cells whereas the detection of vimentin mRNA was also successfully demonstrated in models of wounded skin.^{9, 25}This nanoparticle design has been extended beyond the confines of single target detection to achieve the simultaneous imaging of multiple mRNA targets. Prigodich et al. showed the simultaneous detection of two targets, survivin and actin, by monitoring two separate fluorescence outputs.²⁶Tang and co-workers have presented several studies focusing on multiplexed detection including the imaging of c-myc, tk1 and galnac-t mRNA in vitro in a number of different cell lines as well as the simultaneous fluorescence visualization of survivin and cyclin d1 mRNA in SK-BR-3 and MCF-10A cells.^27-29Furthermore, work by our group has also demonstrated how vimentin and keratin8 mRNA can be simultaneously detected via the use of AuNP dimers.⁸Apart from mRNA, microRNA has also been detected using oligonucleotide – coated nanoprobes. Tu et al. demonstrated the detection of miR-122 in Huh7 cells using hairpin DNA – coated AuNPs. This target constitutes 70 % of the microRNA in the liver and its potential reduction has been associated with hepatocellular carcinoma.³⁰Furthermore, Huang et al. showed how two microRNA targets, miR-21 and miR-141 microRNA, could be simultaneously detected in live cancer cells including HeLa cells and LOVE-1 cells.³¹    

  Although there is a significant amount of research focusing on the use of oligonucleotide – coated gold nanoparticles in in vitro systems there is less work associated with in vivo systems, which is highly important but experimentally more challenging.  

  In this work we demonstrate the targeted detection of mRNA using oligonucleotide – coated gold nanoparticles in the freshwater polyp Hydra vulgaris. Hydra is a small invertebrate classically used as model in developmental biology, which has also recently emerged as an amenable system to test the toxicity and bioactivity of novel functional biomaterials and nanodevices ^32-39, reducing ethical concerns and economic costs related to vertebrate experimentation. Hydra structural anatomy, which presents a tissue grade organization with no organs or biological fluids, allows the study of the interaction between any medium suspended compound and the entire body cell repertoire in a fast, simple and reliable way. The polyp is structured as a hollow and transparent tube with a basal foot and a mouth (hypostome) surrounded by a ring of tentacles in the apical zone (see Figure S1). The body wall is composed by two epithelial layers, an ectoderm facing outwards, and an endoderm facing the inner cavity, plus a limited number of differentiated cell types derived from interstitial stem cells, a fast cycling pool of cells located in the central part of the body column ^{40, 41}. These multipotent stem cells can occur singly (1s) or in clusters of 2, 4, 8 and 16 cells (2s, 4s, 8s, 16s) and undergo self-renewal or differentiation pathways into either nematocytes, the stinging cells characterizing the phylum, or neurons (sensory and ganglionic), secretory cells (gland cells and mucous cells), and gametes. ⁴²Interstitial cells entering a nematocyte pathway undergo different cell divisions (4s, 8s, 16s), which results in nests of cells connected to each other by cytoplasmic bridges (nematoblasts) (see Figure S1). ⁴³Among the numerous genes controlling the stem cell differentiation pathway, Hymyc 1 is specifically expressed in nests of dividing nematoblasts and gland cells, and it is involved in regulating the balance between stem cell self-renewal and differentiation ^44-46

  The well recognisable and defined expression pattern of Hymyc 1 in Hydra, its importance and the availability of its mRNA sequence prompted us to select this gene for the real time study of mRNA expression, in vivo. The gene belongs to the MYC proto-oncogene family (c-Myc, N-Myc and L-Myc) of transcription factors controlling fundamental cellular processes including proliferation, growth, differentiation, metabolism or apoptosis, conferring high translational value to our study. ^47-49As myc deregulated expression occurs in the majority of human cancers, the availability of optimized detection methods may be of interest for the wide scientific community targeting c-myc for therapeutic purposes.

 

EXPERIMENTAL SECTION

  Synthesis of 13.9 ± 1.4 nm AuNPs. A solution of sodium tetrachloroaurate (1 mM, 100 mL) was brought to the boil whilst stirring (700 rpm). A solution of sodium citrate (2 % wt, 5 mL) was then injected into the gold solution. Following a solution color change, stirring (700 rpm) was continued for further 15 minutes. Once the reaction mixture reached room temperature, a solution of bis-sulfonatophenylphosphine (BSPP, 42 mg in 2 mL of Milli-Q water) was added and the solution was left to stir overnight to ensure successful ligand replacement. The resulting BSPP-coated spherical AuNPs were passed through a 0.45 (µm) Millipore filter to remove large aggregates and further purified by two rounds of centrifugation (10,000 rpm, 20 minutes). Purification was assisted via the gradual addition of a concentrated NaCl solution until a colour change from red to blue was observed indicating particle precipitation. Synthesised AuNPs were finally re-dispersed in 3 mL of Milli-Q water and stored at 4 ºC.

 

  Oligonucleotide Design.  Sequences for Hymyc1-nanoprobes were designed for Hymyc 1 (GenBank Accession no. GQ856263). ‘Sense’ strands were designed to have a length of 29 bases (target sequence including a polyA tail, see Table S1) with a GC content < 50 %. The ‘flare’ strands were designed to have a melting temperature of > 40 °C and a length of 10 bases (see Table S1 for sequences).  The Basic Local Assignment Search Tool (BLAST) tool was used to assess specificity and absence of off target sequences

  Synthesis of DNA – AuNPs for mRNA detection. Synthesised AuNPs were modified with a shell of oligonucleotide ‘sense’ strands designed to detect specific mRNA targets by adopting a salt-aging approach. Briefly, BSPP-coated AuNPs in water (10 nM, 1 mL) were incubated with a solution of thiol-terminated oligonucleotide ‘sense’ strands (3 µM, 1 mL) and were left to shake for 24 h. BSPP (1 mg/ 20 µL, 10 µL) was then added to the reaction mixture along with phosphate buffer (0.1 M, pH 7.4) and SDS (10 %) in order to achieve a final concentration of 0.01 M and 1 % of phosphate buffer and SDS, respectively. Successful oligonucleotide attachment was then achieved by gradually increasing the salt concentration. Six additions of NaCl (2 M) were performed over an 8 h period resulting in a final salt concentration of 0.3 M. Resulting oligonucleotide-coated AuNPs were purified by three rounds of centrifugation (16,400 rpm, 20 minutes) and stored at 4 ºC in hybridisation buffer (5 mM phosphate buffer, 80 mM NaCl).  

  Oligonucleotide ‘sense’ strands were hybridized to their complementary ‘flare’ strands by incubating a solution of oligonucleotide-coated ‘sense’ strands (40 nM, 500 µL), with an excess of the complementary ‘flare’ strand (2.4 µM, 500 µL). Then, the solution was heated to 65 ºC for 5 minutes followed by slow cooling to room temperature. The resulting probes were purified by two rounds of centrifugation (16,400 rpm, 15 minutes) and finally re-dispersed in phosphate buffer saline (PBS).

  Culture of animals. Hydra vulgaris was asexually cultured in Hydra medium (1 mM CaCl₂ and 0.1 mM NaHCO₃) at pH 7. The animals were kept at 18 ± 1 ºC and fed thrice a week with freshly hatched Artemia salina nauplii.

  Toxicity assay. Groups of 10 polyps were placed in a plastic multiwell and incubated with the AuNP probes (10 nM, 300 µL) for 24 h. After washing the polyps with Hydra medium, the animals morphology was monitored using a stereomicroscope (Olympus SZX-RFL2) and potential adverse effects were ranked assigning a numerical score as previously described ⁵⁰.

  In vivo imaging. Groups of 10 polyps from homogenous populations were selected for the experiments and incubated with AuNP probes (10 nM, 300 µL) for 3 h in Hydra medium. Animals were kept at 18 ºC and protected from light. Following extensive washing, in vivo imaging was accomplished using an inverted fluorescence microscope (DMI 6000, Leica equipped with a Leica DFC360FX camera) or a Nikon Eclipse TIE. Images were acquired with a Cy3/TRITC filtercube (λexc = 552 nm, λem = 578 nm) and a FITC filtercube (λexc = 489 nm, λem = 508 nm). Images were taken under the same conditions of acquisition (light and exposure time) and analysis was performed using the LAS AS, Nikon TSI and Image J software systems. At least 4 biological replicas were carried out.

 

RESULTS AND DISCUSSION

Design and synthesis of DNA – AuNPs.

  Scheme 1 demonstrates the main principle of mRNA detection using the DNA – coated nanoprobes. AuNPs were functionalized with thiol modified oligonucleotides, which have a terminal FAM dye (for simplicity these oligonucleotides are termed ‘sense’ strands). A shorter oligonucleotide strand modified with a Cy3 dye (termed ‘flare’ strand) was hybridized to the ‘sense’ strand.  Due to the close proximity of both dyes to the AuNP surface their fluorescence was suppressed by the gold core (OFF state). In the presence of the target mRNA complementary to the sense strand, the flare strand was released from the nanoparticle leading to an increase in its fluorescence signature (Cy3, ON state) that could be detected in live Hydra via fluorescence microscopy.

 

 

Scheme 1. Schematic illustration of nanoprobe function. When in close proximity to the AuNP surface the fluorescence signal of the dyes on both the ‘sense’ and ‘flare’ strands is quenched. Upon mRNA detection, competitive hybridization leads to the displacement of the ‘flare’ strand and the concomitant restoration of its fluorescence signature, which can be detected via fluorescence microscopy. 

 

In this study DNA – coated AuNPs were designed and synthesized for the targeted detection of Hymyc1 mRNA in Hydra vulgaris. By adopting a gradual salt-aging approach 14 ± 1 nm AuNPs were functionalized with a layer of ‘sense’ oligonucleotide strands (see Figure S3, S4 and Table S2 for qualitative characterization). All DNA – AuNPs were thoroughly characterized to determine successful ‘sense’ strand attachment. Through degradation of the gold core and quantitative analysis of the oligonucleotide in solution it was determined that each AuNP was coated with approximately 110 oligonucleotide strands with no significant variation for nanoparticles incubated with other sequences (see Table S3 for quantitative characterization). For mRNA detection, each nanoprobe consisted of approximately 60 × ‘flare’ strands as shown in Table S4 where hybridization was also assessed via fluorescence melting analysis as seen in Figure S5. 

Hydra polyps were incubated with three types of nanoprobes. The first batch was designed to detect the Hymyc1 mRNA (hymyc1 – nanoprobe), the second batch was designed with a scramble sequence (scramble – nanoprobe) that does not detect any mRNA in Hydra (negative control) and the third batch was designed to detect all intracellular mRNA (positive control). The positive control (gmRNA – nanoprobes) was designed to display a polyT ‘sense’ and polyA ‘flare’ strand capable of detecting all mature mRNA via their characteristic polyA tail (see Table S1 for detailed sequences). Scheme 2 shows the strategy of our experiment. Upon incubation and uptake of the Hymyc1 – nanoprobes in live animals, the presence of the specific mRNA would result in the targeted displacement of the ‘flare’ strand. On the other hand, in the case of the scramble – nanoprobe the absence of the target mRNA would result in the lack of displacement of the ‘flare’ strand, which would remain bound to its complimentary ‘sense’ strand.

 

Scheme 2: Schematic illustration of the process of mRNA detection in Hydra. Animals were incubated with nanoprobes designed either with a sequence to specifically detect Hymyc1 mRNA (Hymyc1 – nanoprobes) or with a sequence that does not detect any mRNA (scramble – nanoprobes). Only in the presence of the target mRNA the ‘flare’ strand is released and the fluorescence of the Cy3 dye is restored. 

 

Prior to the experiment, an assessment of toxicity was performed by incubating living polyps with the nanoprobes for 24 h. The induction of putative morphological damages was assessed by assigning numerical scores to progressive morphological alteration.⁵¹The score ranges from 0, where the polyp is disintegrated to 10, where the polyps demonstrate an extended body and tentacles. Our research showed that none of the nanoprobes used throughout this study caused evident morphological changes after a 24 h incubation period, where all the polyp morphological scores were equal to 10. The high biocompatibility of the gold nanoprobes found in this study is in line with previous reports that demonstrated that AuNPs are not toxic to Hydra even at higher concentrations and longer incubation times. ^{18, 52}

 

Detection of Hymyc1 mRNA in Hydra.

  Figure 1 shows that after 3 h of incubation, a red fluorescence signal was observed in animals treated with the nanoprobes that detect Hymyc1 mRNA, but not in those treated with scramble – nanoprobes. The signal was located mainly in the animal’s body column, as expected since Hymyc1 mRNA is expressed in the cells of the gastric region (see Figure S1a for a full image of the animal taken with an optical microscope) and it is absent in head and tentacles (see Figure S2b). On the other hand when incubated with general mRNA–nanoprobes (gmRNA-nanoprobes) capable of detecting all mRNA, a fluorescence signal was located throughout the animals’ body including the head and tentacles (see Figure S2c).⁴⁴

 

Figure 1. Fluorescence microscopy images of the Cy3 (A, D and G) and FAM channel (B, E and H) of the gastric region of live Hydra incubated with nanoprobes specific for the detection of Hymyc1 mRNA (A – C), nanoprobes designed with a scramble sequence, which does not detect any mRNA (D – F) and Hydra not treated with nanoprobes (G – I). Color guide for the different channels: Red (Cy3) – fluorescence signal corresponding to ‘flare’ strand release. Green (FAM) – fluorescence signal corresponding to ‘sense’ strand release. Bright field images of the animal are also presented (C, F and I). Scale bars are 100 µm.

 

  As seen in Figure 1 A, when incubated with the nanoprobes that detect Hymyc1 mRNA, Hydra showed a strong fluorescence signal in the body column due to the release of the Cy3 – labelled ‘flare’ strand. On the other hand, Figure 1 D shows that upon incubation of live animals with scramble – nanoprobes no signal corresponding to ‘flare’ release was detectable. The faint fluorescence detected in Figure 1 D was comparable to the autofluorescence signal detected from live animals prior to treatment with nanoprobes (Figure 1 G). Furthermore, bright field images were also acquired and presented in Figure 1 C, F and I showing the part of the Hydra body being analyzed. This data confirmed the specificity of the system towards the accurate detection of an mRNA target. In each case the absence of a fluorescence signal from the FAM – modified ‘sense’ strand (Figure 1 B, E and H) confirmed that the ‘sense’ strand remained on the nanoparticle surface without any signs of degradation in live tissue.

  Figure 2 and Figure 3 show images at higher magnification after incubation with Hymyc1 – nanoprobes. As seen the Hymyc1 – nanoprobe produced a precise and recognizable fluorescent pattern, due to single and nests of interstitial stem cells, mirroring endogenous Hymyc1 mRNA. Similar expression pattern has been described by whole mount in situ hybridization using Digoxigenin-labelled Hymyc1 RNA probes.^44-46

  Overall, these results demonstrate the possibility to specifically detect Hymyc1 mRNA in real time in vivo. The fact that within the animal body column no green fluorescence could be observed means that the ‘sense’ strand was not displaced from the AuNP surface. On the other hand, the detection of mRNA in the cells means cytoplasmic delivery of AuNPs, where the mRNA is present. Although the mechanism of uptake of these nanoprobes has not been investigated yet, it has been already described that 14 nm spherical AuNPs bearing siRNA can directly penetrate the plasma membrane of ectodermal cells just after 30 min of incubation with Hydra.⁵³Avoiding the classical endocytic pathways, AuNPs were able to deliver the siRNA and induce a gene downregulation.¹⁸The AuNPs were also found on the membrane of interstitial cells, where Hymyc1 should be expressed.

 

Figure 2. Higher magnification fluorescence microscopy images of the gastric region of live Hydra incubated with nanoprobes specific for the detection of Hymyc1 mRNA. The Cy3 (A and , bright field (C and D) and merged channels (E and F) are presented for images taken using a 40 × (A, C and E) and 63 × oil immersion (B, D and F) objective.  Scale bars are 25 µm.

 

 

Figure 3.  Fluorescence microscopy images of the gastric region of live Hydra incubated with nanoprobes specific for the detection of Hymyc1 mRNA where nests of nematoblasts are seen and enlarged in the right corner of the pictures. A) Images obtained using a 10 × objective.  Images obtained using a 20 × objective. Color guide: Red (Cy3) – fluorescence signal corresponding to ‘flare’ strand release. Scale bars are 100 µm.

 

CONCLUSIONS

  In summary, we have shown that small amounts of DNA – coated AuNPs as used within this study are not toxic to Hydra and they can be employed to detect specific mRNAs in these animals. Here, we successfully detected the presence of the Hymyc1 mRNA using the corresponding oligonucleotide nanoprobes without any signs of nanoprobe degradation. On the other hand, no fluorescence was detected when scramble sequence nanoprobes were used. Our results demonstrate the possibility of using DNA – coated AuNPs as a fast and reliable tool to qualitatively monitor the presence or not of specific mRNA targets in Hydra animals. Due to the key role played by the MYC transcription factor family in cell and animal biology, the choice of myc as target gene for our methodology confers high translational impact to our results. In vertebrates the Myc protein controls a variety of processes spanning from cell cycle, to apoptosis and the balance between stem cell self-renewal/differentiation, thus the availability of safe and efficient tools to monitor in real time its expression levels may open the path to a wide use of these DNA – coated AuNPs as novel investigation tools in stem cell and cancer biology and in any in physiological and pathological contexts demanding mRNA detection tools. The strength of our proposed approach relies on the fast kinetics of mRNA detection. Previous studies have relied on in situ hybridization to assess mRNA biodistribution, a technique, which is costly and time consuming as it relies on the in vitro cloning of double stranded DNA encoding for the gene of interest, synthesis of Digoxigenin – labelled riboprobe (antisense strand) and finally on the hybridization of this riboprobe with the endogenous sense mRNA in fixed tissue. Furthermore, this technique is prone to signal saturation and the generation of high signal backgrounds. This study represents an important advance for the fast and accurate detection of mRNA targets within an in vivo environment using these nanoprobes and can pave the way for their use in further clinical applications, as a rapid method for the reliable assessment of mRNA expression in living tissue.   

 

Additional data file at: https://doi.org/10.5258/SOTON/D0727

 

AUTHOR INFORMATION

Corresponding author email: a.kanaras@soton.ac.uk, claudia.tortiglione@cnr.it

AKNOWLEDGEMENTS

AK and MEK would like to thank the Leverhulme Trust (ref RPG-2015-005) and BBSRC (Grant No: BB/P017711/1) for funding of this project. MM acknowledges the European Union ́s Horizon 2020 research and innovation programme (Marie Skłodowska-Curie grant agreement No. 660228).

 

 

 

 REFERENCES

1.         Kelly, K. L.;  Coronado, E.;  Zhao, L. L.; Schatz, G. C., The Optical Properties of Metal Nanoparticles: The Influence of Size, Shape, and Dielectric Environment. J. Phys. Chem. B 2003, 107, 668-677.

2.         Cutler, J. I.;  Auyeung, E.; Mirkin, C. A., Spherical Nucleic Acids. J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 1376-1391.

3.         Giljohann, D. A.;  Seferos, D. S.;  Daniel, W. L.;  Massich, M. D.;  Patel, P. C.; Mirkin, C. A., Gold Nanoparticles for Biology and Medicine. Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 3280-3294.

4.         Heuer-Jungemann, A.;  Harimech, P. K.;  Brown, T.; Kanaras, A. G., Gold Nanoparticles and Fluorescently-Labelled DNA as a Platform for Biological Sensing. Nanoscale 2013, 5, 9503-9510.

5.         Bartczak, D.;  Muskens, O. L.;  Sanchez-Elsner, T.;  Kanaras, A. G.; Millar, T. M., Manipulation of in Vitro Angiogenesis Using Peptide-Coated Gold Nanoparticles. ACS Nano 2013, 7, 5628-5636.

6.         El-Sayed, I. H.;  Huang, X. H.; El-Sayed, M. A., Surface Plasmon Resonance Scattering and Absorption of Anti-EGFR Antibody Conjugated Gold Nanoparticles in Cancer Diagnostics: Applications in Oral Cancer. Nano Lett. 2005, 5, 829-834.

7.         Lytton-Jean, A. K. R.; Mirkin, C. A., A Thermodynamic Investigation Into the Binding Properties of DNA Functionalized Gold Nanoparticle Probes and Molecular Fluorophore Probes. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 12754-12755.

8.         Kyriazi, M. E.;  Giust, D.;  El-Sagheer, A. H.;  Lackie, P. M.;  Muskens, O. L.;  Brown, T.; Kanaras, A. G., Multiplexed mRNA Sensing and Combinatorial-Targeted Drug Delivery Using DNA-Gold Nanoparticle Dimers. ACS Nano 2018, 12, 3333-3340.

9.         Heuer-Jungemann, A.;  El-Sagheer, A. H.;  Lackie, P. M.;  Brown, T.; Kanaras, A. G., Selective Killing of Cells Triggered by Their mRNA Signature in the Presence of Smart Nanoparticles. Nanoscale 2016, 8, 16857-16861.

10.       Barnaby, S. N.;  Perelman, G. A.;  Kohlstedt, K. L.;  Chinen, A. B.;  Schatz, G. C.; Mirkin, C. A., Design Considerations for RNA Spherical Nucleic Acids (SNAs). Bioconjugate Chem. 2016, 27, 2124-2131.

11.       Ding, Y.;  Jiang, Z. W.;  Saha, K.;  Kim, C. S.;  Kim, S. T.;  Landis, R. F.; Rotello, V. M., Gold Nanoparticles for Nucleic Acid Delivery. Mol. Ther. 2014, 22, 1075-1083.

12.       Rosi, N. L.;  Giljohann, D. A.;  Thaxton, C. S.;  Lytton-Jean, A. K. R.;  Han, M. S.; Mirkin, C. A., Oligonucleotide-Modified Gold Nanoparticles for Intracellular Gene Regulation. Science 2006, 312, 1027-1030.

13.       Giljohann, D. A.;  Seferos, D. S.;  Prigodich, A. E.;  Patel, P. C.; Mirkin, C. A., Gene Regulation with Polyvalent siRNA-Nanoparticle Conjugates. J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 2072-2073.

14.       Cutler, J. I.;  Zhang, K.;  Zheng, D.;  Auyeung, E.;  Prigodich, A. E.; Mirkin, C. A., Polyvalent Nucleic Acid Nanostructures. J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 9254-9257.

15.       Jensen, S. A.;  Day, E. S.;  Ko, C. H.;  Hurley, L. A.;  Luciano, J. P.;  Kouri, F. M.;  Merkel, T. J.;  Luthi, A. J.;  Patel, P. C.;  Cutler, J. I.;  Daniel, W. L.;  Scott, A. W.;  Rotz, M. W.;  Meade, T. J.;  Giljohann, D. A.;  Mirkin, C. A.; Stegh, A. H., Spherical Nucleic Acid Nanoparticle Conjugates as an RNAi-Based Therapy for Glioblastoma. Sci. Transl. Med. 2013, 5 1-13.

16.       Sita, T. L.;  Kouri, F. M.;  Hurley, L. A.;  Merkel, T. J.;  Chalastanis, A.;  May, J. L.;  Ghelfi, S. T.;  Cole, L. E.;  Cayton, T. C.;  Barnaby, S. N.;  Sprangers, A. J.;  Savalia, N.;  James, C. D.;  Lee, A.;  Mirkin, C. A.; Stegh, A. H., Dual Bioluminescence and Near-Infrared Fluorescence Monitoring to Evaluate Spherical Nucleic Acid Nanoconjugate Activity In Vivo. Proc. Nat. Ac. Sci. U.S.A 2017, 114, 4129-4134.

17.       Conde, J.;  Tian, F. R.;  Hernandez, Y.;  Bao, C. C.;  Cui, D. X.;  Janssen, K. P.;  Ibarra, M. R.;  Baptista, P. V.;  Stoeger, T.; de la Fuente, J. M., In Vivo Tumor Targeting via Nanoparticle-Mediated Therapeutic siRNA Coupled to Inflammatory Response in Lung Cancer Mouse Models. Biomaterials 2013, 34, 7744-7753.

18.       Conde, J.;  Ambrosone, A.;  Sanz, V.;  Hernandez, Y.;  Marchesano, V.;  Tian, F.;  Child, H.;  Berry, C. C.;  Ibarra, M. R.;  Baptista, P. V.;  Tortiglione, C.; de la Fuente, J. M., Design of Multifunctional Gold Nanoparticles for In Vitro and In Vivo Gene Silencing. ACS Nano 2012, 6, 8316-8324.

19.       Conde, J.;  Ambrosone, A.;  Hernandez, Y.;  Tian, F. R.;  McCully, M.;  Berry, C. C.;  Baptista, P. V.;  Tortiglione, C.; de la Fuente, J. M., 15 Years on siRNA Delivery: Beyond the State-of-the-Art on Inorganic Nanoparticles for RNAi Therapeutics. Nano Today 2015, 10, 421-450.

20.       Halo, T. L.;  McMahon, K. M.;  Angeloni, N. L.;  Xu, Y.;  Wang, W.;  Chinen, A. B.;  Malin, D.;  Strekalova, E.;  Cryns, V. L.;  Cheng, C.;  Mirkin, C. A.; Thaxton, C. S., NanoFlares for the Detection, Isolation, and Culture of Live Tumor Cells from Human Blood. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2014, 111, 17104-17109.

21.       Seferos, D. S.;  Giljohann, D. A.;  Hill, H. D.;  Prigodich, A. E.; Mirkin, C. A., Nano-flares: Probes for Transfection and mRNA Detection in Living Cells. J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 15477-15479.

22.       Yang, Y. J.;  Huang, J.;  Yang, X. H.;  Quan, K.;  Wang, H.;  Ying, L.;  Xie, N. L.;  Ou, M.; Wang, K. M., FRET Nanoflares for Intracellular mRNA Detection: Avoiding False Positive Signals and Minimizing Effects of System Fluctuations. J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 8340-8343.

23.       Jayagopal, A.;  Halfpenny, K. C.;  Perez, J. W.; Wright, D. W., Hairpin DNA-Functionalized Gold Colloids for the Imaging of mRNA in Live Cells. J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 9789-9796.

24.       Zhou, Q. M.;  Qian, Z. Y.; Gu, Y. Q. In Detection of MDR1 mRNA Expression With Optimized Gold Nanoparticle Beacon, Conference on Reporters, Markers, Dyes, Nanoparticles, and Molecular Probes for Biomedical Applications VIII, San Francisco 2016, DOI:  

10.1117/12.2220035.

25.       Vilela, P.;  Heuer-Jungemann, A.;  El-Sagheer, A.;  Brown, T.;  Muskens, O. L.;  Smyth, N. R.; Kanaras, A. G., Sensing of Vimentin mRNA in 2D and 3D Models of Wounded Skin Using DNA-Coated Gold Nanoparticles. Small 2018, 14, 1703489.

26.       Prigodich, A. E.;  Randeria, P. S.;  Briley, W. E.;  Kim, N. J.;  Daniel, W. L.;  Giljohann, D. A.; Mirkin, C. A., Multiplexed Nanoflares: mRNA Detection in Live Cells. Anal. Chem. 2012, 84, 2062-2066.

27.       Li, N.;  Chang, C.;  Pan, W.; Tang, B., A Multicolor Nanoprobe for Detection and Imaging of Tumor-Related mRNAs in Living Cells. Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 7426-7430.

28.       Qiao, G. M.;  Gao, Y.;  Li, N.;  Yu, Z. Z.;  Zhuo, L. H.; Tang, B., Simultaneous Detection of Intracellular Tumor mRNA with Bi-Color Imaging Based on a Gold Nanoparticle/Molecular Beacon. Chem. Eur. J. 2011, 17, 11210-11215.

29.       Pan, W.;  Zhang, T.;  Yang, H.;  Diao, W.;  Li, N.; Tang, B., Multiplexed Detection and Imaging of Intracellular mRNAs Using a Four-Color Nanoprobe. Anal. Chem. 2013, 85, 10581-10588.

30.       Tu, Y. Q.;  Wu, P.;  Zhang, H.; Cai, C. X., Fluorescence Quenching of Gold Nanoparticles Integrating With a Conformation-Switched Hairpin Oligonucleotide Probe for microRNA Detection. ChemComm. 2012, 48, 10718-10720.

31.       Li, J.; Huang, J.; Yang, X.; Yang, Y.; Quan, K.; Xie, N.; Wu, Y.;Ma, C.; Wang, K.,  Two-Color-Based Nanoflares for Multiplexed MicroRNAs Imaging in Live Cells. Nanotheranostics 2018, 2, 96-105.

32.       Ambrosone, A.;  Mattera, L.;  Marchesano, V.;  Quarta, A.;  Susha, A. S.;  Tino, A.;  Rogach, A. L.; Tortiglione, C., Mechanisms Underlying Toxicity Induced by CdTe Quantum Dots Determined in an Invertebrate Model Organism. Biomaterials 2012, 33, 1991-2000.

33.       Tortiglione, C.;  Antognazza, M. R.;  Tino, A.;  Bossio, C.;  Marchesano, V.;  Bauduin, A.;  Zangoli, M.;  Morata, S. V.; Lanzani, G., Semiconducting Polymers are Light Nanotransducers in Eyeless Animals. Sci. Adv. 2017, 3, 1601699.

34.       Ambrosone, A.;  Roopin, M.;  Pelaz, B.;  Abdelmonem, A. M.;  Ackermann, L. M.;  Mattera, L.;  Allocca, M.;  Tino, A.;  Klapper, M.;  Parak, W. J.;  Levy, O.; Tortiglione, C., Dissecting Common and Divergent Molecular Pathways Elicited by CdSe/ZnS Quantum Dots in Freshwater and Marine Sentinel Invertebrates. Nanotoxicology 2017, 11, 289-303.

35.       Marchesano, V.;  Hernandez, Y.;  Salvenmoser, W.;  Ambrosone, A.;  Tino, A.;  Hobmayer, B.;  M de la Fuente, J.; Tortiglione, C., Imaging Inward and Outward Trafficking of Gold Nanoparticles in Whole Animals. ACS nano 2013, 7, 2431-2442.

36.       Moros, M.;  Ambrosone, A.;  Stepien, G.;  Fabozzi, F.;  Marchesano, V.;  Castaldi, A.;  Tino, A.;  de la Fuente, J. M.; Tortiglione, C., Deciphering Intracellular Events Triggered by Mild Magnetic Hyperthermia In Vitro and In Vivo. Nanomedicine 2015, 10, 2167-2183.

37.       Ambrosone, A.;  Marchesano, V.;  Carregal-Romero, S.;  Intartaglia, D.;  Parak, W. J.; Tortiglione, C., Control of Wnt/beta-Catenin Signaling Pathway In Vivo via Light Responsive Capsules. ACS Nano 2016, 10, 4828-4834.

38.       Malvindi, M. A.;  Carbone, L.;  Quarta, A.;  Tino, A.;  Manna, L.;  Pellegrino, T.; Tortiglione, C., Rod-Shaped Nanocrystals Elicit Neuronal Activity In Vivo. Small 2008, 4, 1747-1755.

39.       Tortiglione, C., An Ancient Model Organism to Test In Vivo Novel Functional Nanocrystals In Biomedical Engineering: From Theory to Application Fazel-Rezai, R., Ed. InTech - Open Access Publisher: 2011; Vol. Biomedical Engineering: from theory to application pp 225-252.

40.       Bode, H. R., The Interstitial Cell Lineage of Hydra: a Stem Cell System That Arose Early in Evolution. J. Cell Sci. 1996, 109, 1155-1164.

41.       Hobmayer, B.;  Jenewein, M.;  Eder, D.;  Eder, M.-K.;  Glasauer, S.;  Gufler, S.;  Hartl, M.; Salvenmoser, W., Stemness in Hydra - A Current Perspective. Int.J.Dev. Biol.2012, 56, 509-517.

42.       David, C. N.; Gierer, A., Cell Cycle Kinetics and Development of Hydra Attenuata. III. Nerve and Nematocyte Differentiation. J. Cell Sci. 1974, 16, 359-375.

43.       Bode, H. R., The Interstitial Cell Lineage of Hydra: A Stem Cell System That Arose Early in Evolution. J. Cell Sci. 1996, 109, 1155-1164.

44.       Hartl, M.;  Mitterstiller, A. M.;  Valovka, T.;  Breuker, K.;  Hobmayer, B.; Bister, K., Stem Cell-Specific Activation of an Ancestral myc Protooncogene with Conserved Basic Functions in the Early Metazoan Hydra. Proc. Nat. Ac. Sci. U.S.A. 2010, 107, 4051-4056.

45.       Ambrosone, A.;  Marchesano, V.;  Tino, A.;  Hobmayer, B.; Tortiglione, C., Hymyc1 Downregulation Promotes Stem Cell Proliferation in Hydra Vulgaris. PloS One 2012, 7, 30660.

46.       Hartl, M.;  Glasauer, S.;  Valovka, T.;  Breuker, K.;  Hobmayer, B.; Bister, K., Hydra myc2, a Unique Pre-Bilaterian Member of the Myc Gene Family, is Activated in Cell Proliferation and Gametogenesis. Biol. Open 2014, 3, 397-407.

47.       Dang, C. V.;  O'Donnell, K. A.;  Zeller, K. I.;  Nguyen, T.;  Osthus, R. C.; Li, F., The c-Myc Target Gene Network. Semin. Cancer Biol. 2006, 16, 253-64.

48.       Amati, B.;  Brooks, M. W.;  Levy, N.;  Littlewood, T. D.;  Evan, G. I.; Land, H., Oncogenic Activity of the c-Myc Protein Requires Dimerization with Max. Cell 1993, 72, 233-245.

49.       Eilers, M.; Eisenman, R. N., Myc's Broad Reach. Genes Dev. 2008, 22 (20), 2755-2766.

50.       Wilby, O. K.; Tesh, J. M., The Hydra Assay as an Early Screen for Teratogenic Potential. Toxicol. in vitro 1990, 4, 582-583.

51.       Wilby, O. K.; Tesh, J. M., The Hydra Assay as a Nearly Screen for Teratogenic Potential. Toxicol. in vitro 1990, 4, 582-583.

52.       Ambrosone, A.;  Pino, P. D.;  Marchesano, V.;  Parak, W. J.;  de la Fuente, J. M.; Tortiglione, C., Gold Nanoprisms for Photothermal Cell Ablation In Vivo. Nanomedicine 2014, 9, 1913-1922.

53.       Marchesano, V.;  Hernandez, Y.;  Salvenmoser, W.;  Ambrosone, A.;  Tino, A.;  Hobmayer, B.;  de la Fuente, J. M.; Tortiglione, C., Imaging Inward and Outward Trafficking of Gold Nanoparticles in Whole Animals. ACS Nano 2013, 7, 2431-2442.

 

Table of Contents

Какова практическая польза от этой статьи, кроме той, о которой нельзя говорить уже вслух (по закону Яровой)? Ну хотя бы новые грани Элемента Бога и новые варианты его использования в производстве, например. Имеющий глаза да увидел. 

P.S. При какой там температуре должно храниться то, что нельзя называть вслух иначе, чем в виде хвалебной Оды? Хе-хе.

Сообщение изменено: Архимед (27 ноября 2021 - 11:44)